Зуны шинжлэх ухааны гарын авлага: 40°C-ийн дулааны долгион молекулын туршилттай таарах үед

Сүүлийн үед Хятадын ихэнх нутгаар өндөр температур үргэлжилсээр байна. 7-р сарын 24-ний өдөр Шаньдун мужийн цаг уурын ажиглалтын төвөөс өндөр температурын шар өнгийн сэрэмжлүүлэг гаргаж, ойрын 4 хоногт дотоод бүс нутагт 35-37°C (111-133°F) "саунтай төстэй" температур, 80%-ийн чийгшилтэй байх төлөвтэй байна. Шинжааны Турпан зэрэг газруудад агаарын температур 48 хэмд ойртож байна. Хубэй мужийн Ухань, Шиаоган хотуудад улбар шар өнгийн түгшүүртэй байгаа бөгөөд зарим нутгаар 37 хэмээс дээш халж байна. Энэхүү халуун халуунд пипеткийн гадаргуу доорх микроскоп ертөнц ер бусын эвдрэлийг мэдэрч байна - нуклейн хүчлүүдийн тогтвортой байдал, ферментийн идэвхжил, урвалжуудын физик байдал зэрэг нь халууны долгионы нөлөөгөөр чимээгүйхэн гаждаг.

Нуклейн хүчлийн олборлолт цаг хугацаатай уралддаг болсон. Агааржуулагч асаалттай байсан ч гадаа температур 40 хэмээс хэтэрсэн үед хагалгааны ширээний температур 28 хэмээс дээш хэлбэлздэг. Энэ үед ил задгай орхисон РНХ-ийн дээжүүд хавар, намрынхаас хоёр дахин хурдан мууддаг. Соронзон ирмэгийн олборлолтод уусгагч хурдасгасан ууршилтаас болж буферийн уусмал нь орон нутгийн хэмжээнд ханасан байдаг ба талстууд амархан тунадасждаг. Эдгээр талстууд нь нуклейн хүчлийг шингээх үр ашигт ихээхэн хэлбэлзэл үүсгэдэг. Органик уусгагчийн дэгдэмхий чанар нэгэн зэрэг нэмэгддэг. 30 ° С-ийн температурт хлороформын дэгдэмхийжилтийн хэмжээ 25 ° C-тай харьцуулахад 40% -иар нэмэгддэг. Ашиглалтын явцад утааны бүрхүүл дэх салхины хурд 0.5 м/с байх ёстой бөгөөд хамгаалалтын үр нөлөөг хадгалахын тулд нитрил бээлий хэрэглэх шаардлагатай.

ПГУ-ын туршилтууд нь илүү төвөгтэй температурын зөрчилтэй тулгардаг. Taq фермент, урвуу транскриптаза зэрэг урвалжууд температурын гэнэтийн хэлбэлзэлд маш мэдрэмтгий байдаг. -20 хэмийн хөлдөөгчөөс зайлуулсны дараа хоолойн хананд конденсац үүсэх нь урвалын системд орвол ферментийн үйл ажиллагааг 15%-иар алддаг. dNTP уусмалууд нь өрөөний температурт (>30 ° C) 5 минутын турш өртсөний дараа илрэхуйц доройтлыг харуулж чадна. Багажны үйл ажиллагаа нь өндөр температурт мөн саад болдог. Лабораторийн орчны температур >35°С, ПГУ-ын багажийн дулаан ялгаруулах клиренс хангалтгүй (хананаас 50 см-ээс бага) үед дотоод температурын зөрүү 0.8°С хүрч болно. Энэ хазайлт нь 96 худагтай хавтангийн ирмэг дээр олшруулах үр ашгийг 40% -иар бууруулахад хүргэдэг. Тоосжилтын шүүлтүүрийг тогтмол цэвэрлэж байх ёстой (тоос хуримтлагдах нь дулаан ялгаруулах үр ашгийг 50% -иар бууруулдаг), шууд агааржуулагчаас зайлсхийх хэрэгтэй. Цаашилбал, ПГУ-ын туршилтыг нэг шөнийн дотор хийхдээ дээжийг хадгалахын тулд ПГУ-ын багажийг "түр зуурын хөргөгч" болгон ашиглахаас зайлсхий. 4°С-т 2 цагаас илүү хугацаагаар хадгалах нь халсан таг хаагдсаны дараа конденсац үүсч, урвалын системийг шингэлж, багажийн металл модулиудыг зэврүүлж болзошгүй.

Өндөр температурын байнгын сэрэмжлүүлэгтэй тулгарсан молекулын лабораториуд мөн дохио өгөх ёстой. Үнэт РНХ дээжийг өндөр температурт нэвтрэхийг хязгаарласан -80°С-ийн хөлдөөгчийн арын хэсэгт хадгална. -20 хэмийн хөлдөөгчийн хаалгыг өдөрт таваас дээш удаа онгойлгох нь температурын хэлбэлзлийг улам хүндрүүлнэ. Өндөр дулаан ялгаруулах төхөөрөмж нь хоёр тал болон хойд талд 50 см-ээс багагүй дулаан ялгаруулах зайг шаарддаг. Цаашилбал, туршилтын цагийг өөрчлөхийг зөвлөж байна: РНХ олборлох, qPCR ачаалах зэрэг температурт мэдрэмтгий үйлдлүүдэд 7:00-10:00; Өгөгдлийн шинжилгээ зэрэг туршилтын бус ажилд 13:00-16:00 цаг. Энэхүү стратеги нь өндөр температурын оргил үеийг чухал алхамуудад саад учруулахаас үр дүнтэй сэргийлж чадна.

Дулааны долгионы үед молекулын туршилт хийх нь техник, тэвчээрийг хоёуланг нь шалгадаг. Зуны нарны туяанд соруураа тавиад, илүү их дулааныг гадагшлуулахын тулд дээжэндээ нэмэлт хайрцаг мөс нэмэх цаг болсон байх. Температурын хэлбэлзлийг хүндэтгэх нь зуны бүгчим саруудад лабораторийн хамгийн нандин чанар бөгөөд зуны 40 хэмийн халуунд молекулуудад хүртэл сайтар хамгаалагдсан "хиймэл туйлын бүс" хэрэгтэй болдог.