ПГУ-ын анализаторын алдааг олж засварлах: Түгээмэл асуултууд ба шийдлүүд

Полимеразын гинжин урвалын (ПГУ) анализаторууд нь молекул биологийн чухал хэрэгсэл бөгөөд судлаачдад генетикийн судалгаанаас клиник оношлогоонд ашиглах ДНХ-ийг нэмэгдүүлэх боломжийг олгодог. Гэсэн хэдий ч аливаа нарийн төвөгтэй төхөөрөмжийн нэгэн адил ПГУ-ын анализатор нь түүний гүйцэтгэлд нөлөөлдөг асуудлуудтай тулгардаг. Энэ нийтлэлд зарим нийтлэг асуултуудыг авч үзэх болноПГУ-ын анализаторалдааг олж засварлаж, нийтлэг асуудлуудыг практик шийдлээр хангадаг.

1. Яагаад миний ПГУ-ын урвал олшрохгүй байна вэ?

Хэрэглэгчдэд тулгардаг хамгийн нийтлэг бэрхшээлүүдийн нэг бол ПГУ-ын урвал нь зорилтот ДНХ-ийг өсгөх чадваргүй байдаг. Үүнийг хэд хэдэн хүчин зүйлээр холбож болно:

Буруу праймер дизайн: Таны праймерууд зорилтот дараалалд тохирсон, хайлах оновчтой температур (Tm) байгаа эсэхийг шалгаарай. Өвөрмөц бус холболтоос зайлсхийхийн тулд праймер дизайн хийхэд програм хангамжийн хэрэгслийг ашиглана уу.

Загварын ДНХ хангалтгүй: Та хангалттай хэмжээний загвар ДНХ ашиглаж байгаа эсэхээ шалгаарай. Хэт бага нь сул эсвэл олшруулахгүй байх болно.

Дээж дэх дарангуйлагчид: Дээж дэх бохирдуулагч нь ПГУ-ын урвалыг дарангуйлдаг. ДНХ-ээ цэвэршүүлэх эсвэл задлах өөр аргыг ашиглах талаар бодож үзээрэй.

Шийдэл: Праймерын загвараа шалгаж, загварын концентрацийг нэмэгдүүлж, дээждээ дарангуйлагч агуулаагүй эсэхийг шалгаарай.

2. Миний ПГУ-ын бүтээгдэхүүн яагаад буруу хэмжээтэй байна вэ?

Хэрэв таны ПГУ-ын бүтээгдэхүүний хэмжээ хүлээгдэж байгаа шиг биш бол энэ нь урвалын нөхцөл эсвэл ашигласан найрлагатай холбоотой асуудал байгааг илтгэнэ.

Өвөрмөц бус олшруулалт: Хэрэв праймер зориулалтын бус газартай холбогдвол энэ нь тохиолдож болно. BLAST гэх мэт хэрэгслийг ашиглан праймеруудын өвөрмөц байдлыг шалгана уу.

Буруу зөөлрүүлэх температур: Хэрэв зөөлрүүлэх температур хэт бага байвал тусгай бус холболт үүсч болно. Градиент ПГУ-ын аргаар зөөлрүүлэх температурыг оновчтой болгох.

Шийдэл: ПГУ-ын бүтээгдэхүүний нарийвчлалыг сайжруулахын тулд праймерын өвөрмөц байдлыг баталгаажуулж, зөөлрүүлэх температурыг оновчтой болгоно.

3. Миний ПГУ-ын анализатор алдааны мэдэгдлийг харуулж байна. би яах ёстой вэ?

ПГУ-ын анализатор дээрх алдааны мессежүүд нь түгшүүр төрүүлж болох ч болзошгүй асуудлуудын талаар мэдээлэл өгдөг.

Шалгалт тохируулгын асуудал: ПГУ-ын анализатор зөв тохируулагдсан эсэхийг шалгаарай. Тогтмол засвар үйлчилгээ, шалгалт тохируулга хийх нь үнэн зөв үр дүнд хүрэхэд чухал ач холбогдолтой.

Програм хангамжийн бүлэг: Заримдаа програм хангамжийн алдаа нь асуудал үүсгэдэг. Компьютерээ дахин эхлүүлээд програм хангамжийн шинэчлэлтүүдийг шалгана уу.

ШИЙДЭЛ: Тусгай алдааны кодыг хэрэглэгчийн гарын авлагаас харж, санал болгож буй алдааг олж засварлах алхмуудыг дагана уу. Тогтмол засвар үйлчилгээ нь олон асуудлаас урьдчилан сэргийлэх боломжтой.

4. Миний ПГУ-ын урвалын үр дүн яагаад нийцэхгүй байна вэ?

Тогтворгүй ПГУ-ын үр дүн нь хэд хэдэн шалтгааны улмаас урам хугарах болно:

Урвалжийн чанар: Фермент, буфер, dNTP зэрэг бүх урвалжууд шинэхэн, өндөр чанартай эсэхийг шалгаарай. Хугацаа нь дууссан эсвэл бохирдсон урвалжууд нь өөрчлөлтийг үүсгэж болно.

Дулааны цикл тохируулагч: Тогтворгүй температурын тохиргоо нь ПГУ-ын процесст нөлөөлж болзошгүй. Дулааны эргэлтийн тохируулгыг тогтмол шалгаж байх.

Шийдэл: Тогтвортой үр дүнд хүрэхийн тулд өндөр чанартай урвалж хэрэглэж, дулааны циклээ тогтмол тохируулаарай.

5. ПГУ-ын урвалын үр ашгийг хэрхэн сайжруулах вэ?

ПГУ-ын урвалын үр ашгийг дээшлүүлэх нь өндөр ургац, илүү найдвартай үр дүнд хүргэдэг.

Урвалын нөхцлийг оновчтой болгох: Өөр өөр концентрацитай праймер, загвар ДНХ болон MgCl2 ашиглан туршилт хийнэ. ПГУ-ын урвал бүр оновчтой ажиллахын тулд өвөрмөц нөхцөл шаарддаг.

Өндөр нарийвчлалтай фермент ашиглах: Хэрэв нарийвчлал чухал бол олшруулах явцад алдаа гарахыг багасгахын тулд өндөр нарийвчлалтай ДНХ полимеразыг ашиглах талаар бодож үзээрэй.

Шийдэл: ПГУ-ын тусгай тохируулгын хамгийн сайн нөхцлийг олохын тулд оновчлолын туршилтыг хийнэ үү.

Товчхондоо

Алдааг олж засварлах aПГУ-ын анализаторЭнэ нь маш хэцүү ажил байж болох ч нийтлэг асуудлууд болон тэдгээрийн шийдлүүдийг ойлгох нь таны ПГУ-ын туршлагыг ихээхэн сайжруулах болно. Эдгээр нийтлэг асуудлыг шийдсэнээр судлаачид ПГУ-ын үр дүнг сайжруулж, молекул биологийн хэрэглээний найдвартай үр дүнг баталгаажуулж чадна. Тогтмол засвар үйлчилгээ, урвалжуудыг сайтар сонгох, урвалын нөхцлийг оновчтой болгох нь ПГУ-ын шинжилгээг амжилттай явуулах түлхүүр юм.