PCR анализаторын алдааг олж засварлах нь: Байнга асуудаг асуултууд ба шийдлүүд

Полимеразын гинжин урвал (ПГУ) анализаторууд нь молекул биологийн чухал хэрэгсэл бөгөөд судлаачдад генетикийн судалгаанаас эхлээд клиник оношлогоо хүртэлх хэрэглээнд ДНХ-г олшруулах боломжийг олгодог. Гэсэн хэдий ч аливаа нарийн төвөгтэй төхөөрөмжийн нэгэн адил ПГУ анализатор нь түүний гүйцэтгэлд нөлөөлдөг асуудлуудтай тулгарч болно. Энэ нийтлэлд дараах зарим нийтлэг асуултуудыг авч үзнэ.ПГУ-ын анализаторалдааг олж засварлах, нийтлэг асуудлуудад практик шийдлүүдийг санал болгодог.

1. Миний PCR урвал яагаад өсөхгүй байна вэ?

Хэрэглэгчдийн тулгардаг хамгийн түгээмэл асуудлуудын нэг бол PCR урвал нь зорилтот ДНХ-ийг олшруулах чадваргүй байдал юм. Үүнийг хэд хэдэн хүчин зүйлээс шалтгаалж болно:

Буруу праймерын загвар: Праймерууд нь зорилтот дараалалд тохирсон, оновчтой хайлах температуртай (Tm) эсэхийг шалгаарай. Тодорхой бус холболтоос зайлсхийхийн тулд праймерын загварт зориулсан програм хангамжийн хэрэгслийг ашиглаарай.

Загвар ДНХ хангалтгүй: Та хангалттай хэмжээний загвар ДНХ ашиглаж байгаа эсэхээ шалгаарай. Хэт бага нь олшруулалт сул эсвэл огт байхгүй болно.

Дээж дэх дарангуйлагчид: Дээж дэх бохирдуулагч бодисууд нь ПГУ-ын урвалыг дарангуйлж болно. ДНХ-ээ цэвэршүүлэх эсвэл өөр аргаар гаргаж авах талаар бодож үзээрэй.

Шийдэл: Праймерын загвараа шалгаж, загварын концентрацийг нэмэгдүүлж, дээжинд дарангуйлагч агуулаагүй эсэхийг шалгаарай.

2. Миний PCR бүтээгдэхүүн яагаад буруу хэмжээтэй байна вэ?

Хэрэв таны PCR бүтээгдэхүүний хэмжээ хүлээгдэж байсан шиг биш бол энэ нь урвалын нөхцөл эсвэл ашигласан найрлагатай холбоотой асуудал байгааг илтгэж болно.

Тодорхой бус олшруулалт: Хэрэв праймер нь төлөвлөөгүй хэсэгт холбогдвол энэ нь тохиолдож болно. BLAST гэх мэт хэрэгслийг ашиглан праймерын өвөрмөц чанарыг шалгана уу.

Буруу халаах температур: Хэрэв халаах температур хэт бага байвал өвөрмөц бус холболт үүсч болзошгүй. Халаах температурыг градиент PCR ашиглан оновчтой болгох.

Шийдэл: ПГУ-ын бүтээгдэхүүний нарийвчлалыг сайжруулахын тулд праймерын өвөрмөц чанарыг баталгаажуулж, хатаах температурыг оновчтой болгоно.

3. Миний PCR анализатор алдааны мэдэгдэл харуулна. Би юу хийх ёстой вэ?

ПГУ анализатор дээрх алдааны мэдэгдэл нь түгшүүр төрүүлж болох ч болзошгүй асуудлуудын талаарх сэжүүрийг өгч чаддаг.

Тохируулгын асуудлууд: PCR анализаторыг зөв тохируулсан эсэхийг шалгаарай. Тогтмол засвар үйлчилгээ, тохируулгын шалгалт нь үнэн зөв үр дүнд хүрэхэд чухал үүрэгтэй.

Програм хангамжийн бүлэг: Заримдаа програм хангамжийн алдаанаас болж асуудал үүсч болно. Компьютерээ дахин асаагаад програм хангамжийн шинэчлэлтийг шалгана уу.

ШИЙДЭЛ: Тухайн алдааны кодыг хэрэглэгчийн гарын авлагаас харж, санал болгож буй алдааг олж засварлах алхмуудыг дагана уу. Тогтмол засвар үйлчилгээ хийснээр олон асуудлаас урьдчилан сэргийлж чадна.

4. Миний ПГУ-ын урвалын үр дүн яагаад тогтворгүй байна вэ?

ПГУ-ын үр дүнгийн зөрүү хэд хэдэн шалтгааны улмаас бухимдал төрүүлж болно:

Урвалжийн чанар: Фермент, буфер, dNTP зэрэг бүх урвалжууд шинэхэн, өндөр чанартай эсэхийг шалгаарай. Хугацаа нь дууссан эсвэл бохирдсон урвалжууд нь хувьсах шинж чанартай байж болно.

Дулааны циклерийн тохируулга: Тогтворгүй температурын тохиргоо нь PCR процесст нөлөөлж болзошгүй. Дулааны циклерийн тохируулгыг тогтмол шалгаж байгаарай.

Шийдэл: Тогтвортой үр дүнг хангахын тулд өндөр чанартай урвалжуудыг ашиглаж, дулааны циклерээ тогтмол тохируулна уу.

5. ПГУ-ын урвалын үр ашгийг хэрхэн сайжруулах вэ?

ПГУ-ын урвалын үр ашгийг дээшлүүлэх нь өндөр ургац, илүү найдвартай үр дүнд хүргэх боломжтой.

Урвалын нөхцлийг оновчтой болгох: Праймер, загвар ДНХ болон MgCl2-ийн өөр өөр концентрацийг ашиглан туршилт хий. ПГУ-ын урвал бүр оновчтой гүйцэтгэлд хүрэхийн тулд өвөрмөц нөхцөл шаардаж болно.

Өндөр нарийвчлалтай фермент ашиглах: Хэрэв нарийвчлал чухал бол олшруулах явцад гарах алдааг багасгахын тулд өндөр нарийвчлалтай ДНХ полимераза ашиглах талаар бодож үзээрэй.

Шийдэл: Өөрийн PCR тохиргоонд хамгийн сайн нөхцлийг олохын тулд оновчлолын туршилт хий.

Товчхондоо

Алдааг олж засварлах ньПГУ-ын анализаторЭнэ нь хэцүү ажил байж болох ч нийтлэг асуудлууд болон тэдгээрийн шийдлүүдийг ойлгох нь таны PCR туршлагыг мэдэгдэхүйц сайжруулж чадна. Эдгээр нийтлэг асуудлуудыг шийдснээр судлаачид PCR-ийн үр дүнг сайжруулж, молекул биологийн хэрэглээнд найдвартай үр дүнг баталгаажуулж чадна. Тогтмол засвар үйлчилгээ, урвалжийг сайтар сонгох, урвалын нөхцлийг оновчтой болгох нь PCR шинжилгээг амжилттай хийх түлхүүр юм.