PCR урвалын хөндлөнгийн хүчин зүйлүүд

PCR урвалын үед зарим нь саад бэрхшээл тулгардаг.
PCR-ийн маш өндөр мэдрэмжтэй холбоотой тул Бохирдлыг PCR үр дүнд нөлөөлж, хуурамч эерэг үр дүнг үүсгэж болно.
Хуурамч үр дүнд хүргэдэг янз бүрийн эх сурвалжууд юм. PCR хольцын нэг буюу хэд хэдэн чухал хэсэг эсвэл олшруулсан хариу урвал нь өөрийгөө дарангуйлдаг, оношлогооны шинжилгээ хийхэд саад болж болно. Энэ нь үр ашгийг бууруулж, тэр ч байтугай хуурамч сөрөг үр дүнг хүргэж болзошгүй юм.
Дарааллаас гадна дарангуйлалаас гадна зорилтот цөмийн бүрэн шумуулалт, / эсвэл хадгалах нөхцөлийг дээж авахаас өмнө хүргэх болно. Ялангуяа өндөр температурт эсвэл хангалтгүй хадгалалт эсвэл хангалтгүй хадгалалт нь эсүүд, цөмийн хүчил алдагдуулж болзошгүй юм. Эс эс ба эдийг бэхэлгээ, парафин хэллэг нь ДНХ-ийн хуваагдлыг сайн мэддэг бөгөөд Эдгээр тохиолдлуудад, бүр оновчтой тусгаарлалт, цэвэршилт нь тус болохгүй.

Төрөлөнгө 1 | ДНХ-ийн бүрэн бүтэн байдлын хөдөлгөөнгүй байдлын үр нөлөө
Agarose Gel Elimpophoresis-ийн чанар нь ДНХ-ийн чанар нь маш их ялгаатай байсан гэдгийг харуулсан. ДНХ-ийн ДНХ-ийн ДНХ-ийн ДНХ нь бэхэлгээний аргаас хамаарч олборлолт дээр байрлуулсан байв. ДНХ нь уугуул хөлдөөсөн дээж, буфертэй төвийг сахисан формалин дээр хадгалсан тохиолдолд л хадгалагджээ. Хүчтэй хүчиллэг Bouin бэхэлгээний бэхэлгээ, хэлбэртэй, хэлбэргүй, форматтай хүчиллэг агуулсан, формалин нь ДНХ-ийн ихээхэн алдагдалд хүргэсэн. Үлдсэн фракц нь маш их хуваасан.
Зүүн талд, хэсэг хэсгийн урт нь килобазын хосоор илэрхийлэгддэг (KBP)

Оюутрал 2 | Нуклын хүчлийн зорилтот байдлыг алдагдуулах
(a) Аль алинд нь 3'-5 'цоорхой нь зорилтот ДНХ-д завсарлага авах болно. ДНХ-ийн синтез нь жижиг хэсгүүдэд тохиолдох болно. Гэсэн хэдий ч, хэрэв праймер дүүргэх сайт нь ДНХ-ийн хэлтэст байхгүй бол зөвхөн шугаман ололт үүсгэдэг. Хамгийн тааламжтай тохиолдолд фрагментууд бие биенээ дахин нягталж болно, гэхдээ үлгэрийн түвшинг илрүүлэх түвшин бага байх болно.
(б) суурийн алдагдал, гогцоо, гогцоо, гогцоо, гогцоо, гогцоо, гогцоо алдах нь H-BoD-ийн тооноос буурахад хүргэдэг. Уртастай дулаарах үе шатанд праймерууд матриц ДНХ-ээс холдох бөгөөд бага зэрэг хатуу нөхцөлд ч төгсөхгүй.
(c) зэргэлдээ Тимин суурь нь tt dimer үүсгэдэг.
Молекулын оношлогоонд тохиолддог өөр нэг нийтлэг асуудал бол феноф-хлороформ олборлолттой харьцуулахад бага түгээмэл хэрэглэгддэг. Хэт их тохиолдолд энэ нь хуурамч сөрөг талтай холбоотой байж болно. Лизис, ферментийн хоол тэжээлийг буцалгах замаар л цагийг авраар хадгалах боломжтой боловч энэ арга нь хангалтгүй цөмийн хүчлийн сулралд хүргэдэг.

Олшруулах явцад полимеразын үйл ажиллагааг дарангуйлах

Ерөнхийдөө дарангуйлал, дарангуйлал нь Subloptimal PCR үр дүнд хүргэдэг бүх хүчин зүйлийг дүрсэлсэн контейнерийн конспрецийг ашигладаг. Хатуу биохимийн мэдрэмжээр дарангуйлал, дарангуйлал нь ферментийн үйл ажиллагаанд хязгаарлагдмал байдаг.
Түүвэр эсвэл янз бүрийн буфатор, янз бүрийн буфатор, referents, realge-ийг агуулсан, капитал, кросактыг шууд хориглоно.
Гэсэн хэдий ч хариу урвалын бүрэлдэхүүн хэсгүүд, зорилтот цөмийн хүчлийн хооронд олон харилцан үйлчлэл нь "PCR-ийн дарангуйлагч" гэж тодорхойлдог. Нэгэнт эсийн бүрэн бүтэн байдал нь тусгаарлалт, нукалаас ялгарч, нуклелийн хүчил ялгарч, дээжийн хэрэглээний шийдэл бөгөөд түүний эргэн тойрны шийдэл, хатуу үе шатууд, хатуу үе шатууд гарч болзошгүй юм. Жишээлбэл, 'Хашаанчдын' -ийг ковальер бус харилцан үйлчлэлээр дамжуулан дангаараа эсвэл давхар судлалын тоог бууруулж, PCR-ийн хариу урвалын хөлөг онгоцыг даван туулж, ариусгах, цэвэршилтийг даван туулах замаар ариусгах, цэвэршүүлэлтээр дамжуулж болно.
In general, PCR inhibitors are present in most body fluids and reagents used for clinical diagnostic tests (urea in urine, hemoglobin and heparin in blood), dietary supplements (organic components, glycogen, fat, Ca2+ ions) and components in the environment (phenols, heavy metals)

Илүү тархалт PCR-ийн дарангуйлагчийг бактери болон эукариот эсүүдээс олж болно. Олборлолтын үеэр эсвэл олборлолтын үеэр цэвэрлэгээ хийх нь PCR дарангуйлагчдыг зайлуулах хамгийн тохиромжтой арга юм.
Өнөөдрийн олон янзын автоматжуулагч тоног төхөөрөмж нь олон гарын авлагыг сольж болно, гэхдээ 100% сэргээх, эсвэл зорилтот байдлыг хангахад хэзээ ч хүрч байгаагүй. Боломжит дарангуйлагч нь цэвэрлэсэн цөмийн хүчилд байдаг эсвэл аль хэдийн хүчин төгөлдөр болсон байж магадгүй юм. Дарангуйлагчдын нөлөөллийг багасгах өөр өөр стратеги байдаг. Тохирох полимеразын сонголтыг дарангуйлагч үйл ажиллагаанд ихээхэн нөлөөлж болно. PCR дарангуйлалыг багасгах бусад батлагдсан аргууд нь BSA гэх мэт полимеразын концентрациас нэмэгдэж байгаа эсвэл Addys-ийг нэмэгдүүлэх явдал юм.
PCR урвалыг дарангуйлах нь дотоод процессын чанарын хяналт (IPC) -ийг ашиглах замаар харуулж болно.
Edtaol болон Edta, Cetta, Cetta, Cetta, Cetta, Cetta, SPECOP, SPECOOLOL, PENOL, PENOL, PENOL, PENOL-ийг зайлуулах. Төвлөрлөөс хамааран тэд PCR-ийг идэвхжүүлж эсвэл дарангуйлж магадгүй юм.